CELULAS

Las células eucariotas poseen un núcleo definido con el material genético organizado en cromosomas. Todos los organismos multicelulares están formados por células eucariotas y también muchos organismos unicelulares y coloniales.

MATERIAL:                                       SUSTANCIAS:

1 microscopio óptico                           Agua destilada

5 portaobjetos                                      Reactivos de Gram: cristal violeta, lugol, 

5 cubreobjetos                                        alcohol-cetona, safranina.

1 agitador                                            Sudan III

1 bisturí con navaja                             Yogurt casero

1 vaso de precipitado de 100 ml         Agua de charco o de florero

2 goteros                                             Cebolla, papa, plátano, manzana, papaya,

1 servilleta de papel                               aguacate, nuez, zanahoria, betabel, flores de gladiola

1 trozo de papel seda                              roja, elodea (planta acuática que llaman cola de zorro).

1 caja de petri 

PROCEDIMIENTO:

Células bacterianas

Las bacterias con células muy pequeñas (1 a 3 micrómetros) y pueden tener forma esférica (cocos), de bastón (bacilos) o espiral (espirilos).

1- Haz un frotis de la muestra de yogurt.

2- Realiza una tincion de Gram.

3- Coloca un portaobjetos y obsérvalo a inmersión.

4- Identifica la forma de la célula, la pared y el citoplasma.

Bacterias verdes- azules (cianobacterias) 

Las cianobacterias son organismos procariontes fotosinteticos. La clorofila que contiene esta dispersa en el citoplasma. Ademas de la clorofila, las cianofitas poseen pigmentos accesorios (carotenoides y ficobilinas)

1- coloca sobre un portaobjetos una gota de agua de charco estancado.

2- coloca un cubreobjetos y objetos y observa al microscopio con el seco fuerte. 

Aminoplastos en plátano 

Las células del plátano también poseen aminoplastos que almacenan almidón pero que se diferencian de los aminoplastos de la papa en su morfología. 

1- raspa una pequeña cantidad de tejido de la superficie del fruto y dispersarla en el portaobjetos.

2- agrega una gota de lugol, coloca un cubreobjetos y observa con seco débil y fuerte.

3- compara la morfología de los aminoplastos de papa y plátano

4- repite el mismo proceso con manzana y papaya.

platano

papa

Cromoplastos de zanahoria y betabel.
En la zanahoria y el betabel, asi como en otras partes de distintas especies de plantas, se encuentran cromoplastos que contienen pigmentos amarillos, naranjas o rojos, llamados carotenos.
1- corta una delgada capa de tejido de la porción mas extrema de la zanahoria, colócala sobre una gota de agua en el portaobjetos y acopla un cubreobjetos.
2- observa en el microscopio con el seco débil y fuerte.
3- repite el procedimiento con el betabel.

Cromoplastos en flores coloridas.

Las flores de color entre azul y rojo contienen en los cromoplastos unos pigmentos llamados antoclaninas. 

1- desprende la epidermis lo mas delgada que sea posible de una flor colorida, puede ser gladiola, colócala sobre el portaobjetos con una gota de agua destilada y cúbrela con el cubreobjetos.

2- observa con seco débil y seco fuerte.

Oleaplastos en células de aguacate o nuez.

Son plastidios que almacenan aceites como reserva de compuestos energéticos.

1- haz un raspado de aguacate y coloca una pequeña porción sobre un portaobjetos con una gota de agua.

2- agrega una gota de Sudan III y observa con seco débil y seco fuerte, los oleoplastos se ven de color naranja.

3- repetir el procedimiento con la nuez.

aguacate

nuez

Pared celular y núcleos en células de catafilia de cebolla.

La cebolla es un tallo del cual nacen las hojas modificadas llamadas catafilias, que no poseen clorofila y almacenan una gran cantidad de carbohidratos.

1- desprende con una pinza la epidermis interna de un trozo de catafilia de cebolla, colócala sobre un portaobjetos añadiendo una gota de agua y una de lugol, y acopla un cubreobjetos.

2- observa con objetivos seco débil y seco fuerte. 

Cloroplastos y pared celular en células de hoja de elodea.

Las hojas de elodea se pueden observar al MO sin ninguna preparación previa ya que están formadas por dos capaz de células.

1- coloca una hojita de elodea sobre un portaobjetos, agrégale una gota de agua y colocale un cubreobjetos.

2- observar en seco débil y seco fuerte. 

Aminoplastos en tubérculos de papa.

Los aminoplastos son plastidios que contiene el almidón presente en el tubérculo de la papa.

1-  corta un trozo de tubérculo de papa y raspa la superficie de corte con una hoja de afeitar o de bisturí, coloca el raspado en una gota de agua cobre un cubreobjetos, agrega una gota de lugol y acopla un cubreobjetos.

2- observar con seco débil y seco fuerte.

3- localiza los aminoplastos teñidos de azul.

CONCLUSIONES:

Gracias a esta practica se aprendió a diferenciar las células durante la practica y los organismos unicelulares y coloniales.

GONADOTROPINA CORIÓNICA HUMANA (HCG)

La gonadotropina coriónica humana (hCG) es una hormona glicoproteica producida en el embarazo, fabricada por el embrión en desarrollo poco después de la concepción y más tarde por el sinciciotrofoblasto (parte de la placenta).

Fundamento.

Todas las pruebas de embarazo buscan detectar una hormona especial que sólo se encuentra en la orina o en la sangre cuando una mujer está embarazada.

La Gonadotropina Coriónica humana (hCG), también se la llama hormona del embarazo.

Técnicas de diagnóstico.

Éstas pruebas puedes realizarse mediante la orina o bien de sangre.

RECOLECCION  DE LA MUESTRA

. Se debe recolectar una muestra de orina en un recipiente limpio y seco. Es preferible recolectar la muestra de la primera orina de la mañana.

PROCEDIMIENTO  DE  LA  PRUEBA

. Antes de realizar la prueba permita que la muestra de orina se equilibre a temperatura ambiente (18-30°C).

1.-Abra el sobre y tome el cassette por el lado contrario al depósito de la muestra.

2.- Vacíe aproximadamente 4 gotas de la muestra de orina en el cuentagotas y distribúyala en el deposito del cassette.

3.- Espere de 1 - 5 minutos y lea los resultados. Los resultados positivos se pueden observar en 40 segundos. De cualquier manera, para confirmar los resultados negativos, se necesita esperar el tiempo completo de reacción, no lea los resultados después de 10 minutos

INTERPRETACION   DEL  RESULTADO.

POSITIVO

.

Aparecen dos líneas rojas distintivas. Una línea debe estar en la región de control (C) y la otra en la región de prueba (T).

NEGATIVO

.Aparece una línea roja en la región de prueba (T). No aparece línea roja o rosa definida en la región de (T).

POSITIVO DEBIL.

La línea roja en la región de prueba (T) se muestra desvanecida en comparación con la línea roja de la región de control (C). Esto significa que es necesario repetir la prueba de nuevo en 48 horas.

POSITIVO FUERT E

.

La línea roja en la región de prueba (T) aparece muy brillante y la línea roja en la región de control (C) de la tira aparece muy desvanecida. Esto significa que el embarazo se esta desarrollando al final del tercer trimestre.

RESULTADO: POSITIVO.

BIOMOLÉCULAS.

Entre los compuestos fundamentales de la materia viva de las células encontramos los carbohidratos, lipidos y proteinas; por esta razón, los alimentos que que consumen todos los heterótrofos, incluidos el ser humano,deben contener necesariamente estas macromoléculas.
Mediante el uso de pruebas quimicas sencillas se pueden identificar en elementos la presencia de estas macromoléculas.

OBJETIVO:
El alumno distinguirá en forma práctica que alimentos contienen carbohidratos y cuáles proteinas y grasas.

MATERIALES:
10 tubos de ensaye.
1 gradilla.
2 vasos de precipitado.
1 agitador.
1 mechero Bunsen.
2 pinzas para tubo de ensaye.
1 gotero.
1 pliego de papel estraza.

SUSTANCIAS:

Carbohidratos:
Ácido nítrico al 50%
Lugol (solución alcohólica de yodo)

Proteínas:
Reactivo de Biuret.
Ácido nítrico concentrado.

Lípidos:
Sudan III

MUESTRAS DE ALIMENTOS:
Trigo
Manzana
Zanahoria
Hígado de pollo
Queso
Haba

PROCEDIMIENTO:

Prueba de Lugol:

• Coloca una pequeña cantidad de la muestra en un tubo de ensayo.
• Agrega dos gotas de lugol.
• Observa el color que toma la muestra al reaccionar con el lugol.
• Repite la ´prueba en por lo menos 5 alimentos diferentes.

Prueba de Biuret:

• Agrega 1 ml de reactivo de Biuret a una pequeña porción de muestra colocada en cada tubo de ensaye.
• Observa la coloración.
• Repite la prueba en 5 alimentos diferentes.

Reacción Xantoproteíca:

• Agregar 1 ml de A. nitrico concentrado a una pequeña porcion de muestra colocada en un tubo de ensaye, calienta con precaucion sujetando el tubo con pinzas y metiendo y sacando el tubo de la flama para evitar que se proyecte la solucion.
• Deja resbalar por las paredes del tubo 1 ml de hidróxido de amonio sin agitar, de tal forma que se formen dos capas.
• Repite la prueba en 5 alimentos diferentes.

Reacción de Sudan III:

• Coloca en los tubos pequeñas porciones de las muestras.
• Agregar a cada uno 5ml de agua de grifo.
• Agrega 3 gotas de reactivo de Sudan III
• Agita energicamente y deja reposar por 5 minutos.
• Observa la formacion de gotas de grasa coloreadas con Sudan III de color naranja, lo cual indica que el alimento contiene grasas (prueba positiva).
• Repite en los demás alimentos. 

PRUEBA CON PAPEL DE ESTRAZA:

• Coloca pequeñas cantidades de alimento en pedazos de papel de estraza.
• Dobla el papel sobre el alimento y presiona con los dedos.
• Observa si hay áreas de papel que se vean traslucidas y aparentemente húmedas lo cual indica que el alimento contiene grasas.

ALIMENTO	LUGOL	BIURET	XANTOPROTEICA	SUDAN III	ESTRAZA
HÍGADO		+	+	+	+
ZANAHORIA	++	+	-	+	+
QUESO	+++	+	++	+	+
HABA	+	-	++	-	+
MANZANA	+	+	++	-	+
TRIGO	++	+	+	+	+

RETICULOCITOS.

OBJETIVO: Que el alumno aprenda a identificar y cuantificar correctamente a los reticulocitos.
INTRODUCCION: Los reticulocitos son eritrocitos jovenes y contienen en su interior RNA-ribosomal el cual puede observarse en forma de red (de ahi su nombre) mediante un colorante supravital.
Cuando en la medula osea aumenta la eritropoyesis, aunmenta tambien el numero de reticulocitos que salen hacia la circulacion.

MATERIAL Y REACTIVOS:

• Sangre venosa con EDTA.
• Colorante de azul de cresilobrilante o nuevo azul de metileno.
• Tubos de ensaye.
• Portaobjetos
• Pipetas pasteur tallo corto con bulbo.
• Baño maria.
• Microscopio.
• Aceite de inmersion.

PROCEDIMIENTO:

1. Mezclar la muestra sanguinea y en tubo de ensaye colocar 5 gotas con una pipeta pasteur.
2. Agregarle 5 gotas del colorante con una pipeta pasteur y mezclar.
3. Incubar el tubo de ensaye a 37°C durante 15 minutos en baño maria.
4. Mezclar la suspension y realizar un frotis en el portaobjetos.
5. Dejarlo secar a temperatura ambiente, agregarle una gota de aceite de inmersion y observar con el objetivo de 100 X.
6. Buscar celulas que presenten una red con coloracion azul (reticulocitos). Contar 1000 eritrocitos en diferentes partes del frotis e ir registrando el numero de reticulocitos observados.

RESULTADOS: No. de reticulocitos observados X 100/ Numero total de eritrocitos.

•  4 X 100/900= 0.44%
• 1 X 100/200= 0.5%

INDICES ERITROCITARIOS.

.-Para poder llevar a cabo esta determinacion se emplean los calculos de numero de eritrocitos, Hemoglobina y Hematocrito.

• Numero de eritrocitos: 4,680000
• Hemoglobina: 15.3g/dL
• Hematocrito: 44.3%

VALOR HTO% X 10/ NO. DE ERITROCITOS= V.C.M  M2

443/46= 96.3 M2

VALORES NORMALES: 82-92 M2

Hb en g/dL X 10/ NO. DE ERITROCITOS= HCM EN Pg

153/46= 33.2 Pg

VALORES NORMALES: 29-32Pg

Hb en g/dL X 10/ VALOR HTO%= C.H.C.M %

153/44.3= 34.5%

VALORES NORMALES: 32-36%

HEMATOCRITO.

DETERMINACION DE HEMATOCRITO.

INTRODUCCION: El hematocrito es el volumen que ocupan los eritrocitos en una muestra sanguineay se expresa en porcentaje.

La determinacion de hematocrito es un metodo sencillo y confiable para detectar anemia o policitemia.

El hematocrito se puede determinar mediante dos metodos:

MACROMETODO (WINTROBE)

MICROMETODO.

MATERIAL Y REACTIVOS:

• Tubo de Wintrobe.
• Tupo capilar.
• Plastilina.
• Equipo para venopuncion.
• Centrifuga.
• Microcentrifuga.
• Pipeta pasteur tallo largo.
• Lector para hematocrito o regla.

TECNICA MACROMETODO.

1. Mezclar la muestra sanguinea suavemente y  con una pipeta pasteur llenar el tubo wintrobe colocando la punta de la pipeta hasta el fondo del tubo, la punta de la pipeta se va elevando pe permaneciendo debajo del menisco de sangre para evitar la formacion de burbujas o espuma.
2. El tubo se llena hasta la marca 100 con la muestra sanguinea y se pone a centrifugar durante 30 minutos a 3,000 r.p.m..
3. Se efectua la lectura.

TECNICA MICROMETODO.

1. Mezclar la muestra sanguinea adecuadamente y llenar un tubo capilar hasta 3/4 partes.
2. El extremo vacio que no estuvo en contacto con la sangre se sella con plastilina o calor.
3. El tubo con muestra sanguinea se coloca en la microcentrifuga a 10,000 r.p.m. durante 10 minutos.
4. Leer el porcentaje de hematocrito con el lector o medirlo con una regla.

VALORES NORMALES:

HOMBRE 47.0 + - 5.0.

MUJER: 42.0 + - 5.0.

RESULTADOS MUJER:

MACROMETODO: 48.8% 

MICROMETODO:  2.9%

HEMOGLOBINA.

HEMOGLOBINA.

PRINCIPIO DEL METODO 

La hemoglobina es oxidada por la acción del ferricianuro a 

metahemoglobina y mediante el cianuro se convierte en 

cianmetahemoglobina. 

La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de 

hemoglobina presente en la muestra ensayada1,2. 

SIGNIFICADO CLINICO 

La hemoglobina es una proteína que contiene hierro, otorga el color 

rojo a la sangre. Se encuentra en los glóbulos rojos y es la encargada 

del transporte de oxigeno por la sangre desde los pulmones a los 

tejidos. Cuando el nivel de hemoglobina aparece por debajo de los 

niveles normales indica anemia que puede obedecer a diferentes 

causas: anemia primaria, cáncer, embarazo, enfermedades renales o 

hemorragias. 

Si el nivel de hemoglobina es alto puede deberse a cardiopatías, 

deshidratación o estancia en lugares de gran altitud1,5,6. 

El diagnostico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los 

datos clínicos y de laboratorio. 

REACTIVOS 

HEMOGLOBIN 

50x 

Ferricianuro de potasio 

Cianuro de potasio 

Dihidrogeno fosfato de potasio 

0,60 mmol/L

77 mmol/L

2 mmol/L

 Patrón de Hemoglobina 15 g/dL 

Origen animal 

PRECAUCIONES 

Cianuro de potasio: Nocivo (Xn): R26/27/28: Muy tóxico por 

inhalación, por ingestión y en contacto con la piel. R32: En contacto 

con ácidos libera gases muy tóxicos. 

Peligroso para le medio ambiente (N): R52/53: Nocivo para los 

organismos acuáticos, puede provocar a largo plazo efectos 

negativos en el medio ambiente acuático. 

S7: Manténgase el recipiente bien cerrado. S28: En contacto con la 

piel, lavar inmediatamente y abundantemente con agua. S45: En 

caso de accidente o malestar, acudir inmediatamente al medico. S60: 

Elimínese el producto y su recipiente como residuos peligrosos. S61: 

Evítese su liberación al medio ambiente. Recábense instrucciones 

específicas/ las fichas de datos de seguridad. 

Cianuro (venenoso): La concentración de cianuro en el Reactivo 

concentrado (50x) es sensiblemente menor que la dosis mínima letal 

para el adulto. Su acidificación puede provocar liberación de ácido 

cianhídrico. 

PREPARACION 

Reactivo de trabajo (RT): 

- Para 5 mL 4,9 mL agua destilada + 2 gotas de Reactivo 

- Para 250 mL 245 mL agua destilada + 1 frasco (5 mL) de Reactivo 

Mezclar bien. 

Estabilidad: 2 meses en nevera a 2-8ºC, protegido de la luz. 

CONSERVACION Y ESTABILIDAD 

Todos los componentes del kit son estables, hasta la fecha de 

caducidad indicada en la etiqueta del vial, cuando se mantienen los 

viales bien cerrados a 2-8ºC, protegidos de la luz y se evita la 

contaminación durante su uso. 

No usar reactivos fuera de la fecha indicada. 

Indicadores de deterioro de los reactivos: 

- Presencia de partículas y turbidez. 

- Absorbancia (A) del Blanco a 540 nm ≥ 0,01. 

MATERIAL ADICIONAL 

- Espectrofotómetro o analizador para lecturas a 540 nm. 

- Cubetas de 1,0 cm de paso de luz. 

- Equipamiento habitual de laboratorio. 

MUESTRAS 

Sangre capilar o venosa1

. 

Usar anticoagulantes como EDTA, heparina u oxalato

PROCEDIMIENTO 

1. Condiciones del ensayo: 

Longitud de onda: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 540 nm 

Cubeta:. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. .1 cm paso de luz 

Temperatura . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . .. . . 15-25ºC 

2. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada. 

3. Pipetear: 

 Blanco Patrón Muestra 

RT (mL) 5,0 5,0 5,0 

HEMOGLOBIN CAL (μL) -- 20 -- 

Muestra (μL) -- -- 20 

4. Mezclar e incubar 3 minutos a temperatura ambiente (15-25ºC). 

5. Leer la absorbancia (A) del calibrador y la muestra, frente al Blanco 

de reactivo. 

CALCULOS 

- Con factor2

: 

(A) Muestra x 36,77 = g/dL de hemoglobina en la muestra 

- Con Patrón: 

Patrón)A(

Muestra)A( x 15 (Conc. Patrón) = g/dL de hemoglobina en la muestra 

CONTROL DE CALIDAD 

Cada laboratorio debe disponer su propio Control de Calidad y establecer 

correcciones en el caso de que los controles no cumplan con las tolerancias. HEMOGLOBIN CAL 

VALORES DE REFERENCIA1 

 Hombres 14 - 18 g/dL ≅ 8,7 - 11,2 mmol/L 

 Mujeres 12 - 16 g/dL ≅ 7,5 - 9,9 mmol/L 

Estos valores son orientativos.

RESULTADOS:

(A)MUESTRA / (A)PATRON X 15= gr/dL       ST=.340

.392/.340X15= 17.29gr/dL HOMBRE.

.304/.340X15= 13.41gr/dL MUJER.