RETICULOCITOS.

OBJETIVO: Que el alumno aprenda a identificar y cuantificar correctamente a los reticulocitos.
INTRODUCCION: Los reticulocitos son eritrocitos jovenes y contienen en su interior RNA-ribosomal el cual puede observarse en forma de red (de ahi su nombre) mediante un colorante supravital.
Cuando en la medula osea aumenta la eritropoyesis, aunmenta tambien el numero de reticulocitos que salen hacia la circulacion.

MATERIAL Y REACTIVOS:

• Sangre venosa con EDTA.
• Colorante de azul de cresilobrilante o nuevo azul de metileno.
• Tubos de ensaye.
• Portaobjetos
• Pipetas pasteur tallo corto con bulbo.
• Baño maria.
• Microscopio.
• Aceite de inmersion.

PROCEDIMIENTO:

1. Mezclar la muestra sanguinea y en tubo de ensaye colocar 5 gotas con una pipeta pasteur.
2. Agregarle 5 gotas del colorante con una pipeta pasteur y mezclar.
3. Incubar el tubo de ensaye a 37°C durante 15 minutos en baño maria.
4. Mezclar la suspension y realizar un frotis en el portaobjetos.
5. Dejarlo secar a temperatura ambiente, agregarle una gota de aceite de inmersion y observar con el objetivo de 100 X.
6. Buscar celulas que presenten una red con coloracion azul (reticulocitos). Contar 1000 eritrocitos en diferentes partes del frotis e ir registrando el numero de reticulocitos observados.

RESULTADOS: No. de reticulocitos observados X 100/ Numero total de eritrocitos.

•  4 X 100/900= 0.44%
• 1 X 100/200= 0.5%

INDICES ERITROCITARIOS.

.-Para poder llevar a cabo esta determinacion se emplean los calculos de numero de eritrocitos, Hemoglobina y Hematocrito.

• Numero de eritrocitos: 4,680000
• Hemoglobina: 15.3g/dL
• Hematocrito: 44.3%

VALOR HTO% X 10/ NO. DE ERITROCITOS= V.C.M  M2

443/46= 96.3 M2

VALORES NORMALES: 82-92 M2

Hb en g/dL X 10/ NO. DE ERITROCITOS= HCM EN Pg

153/46= 33.2 Pg

VALORES NORMALES: 29-32Pg

Hb en g/dL X 10/ VALOR HTO%= C.H.C.M %

153/44.3= 34.5%

VALORES NORMALES: 32-36%

HEMATOCRITO.

DETERMINACION DE HEMATOCRITO.

INTRODUCCION: El hematocrito es el volumen que ocupan los eritrocitos en una muestra sanguineay se expresa en porcentaje.

La determinacion de hematocrito es un metodo sencillo y confiable para detectar anemia o policitemia.

El hematocrito se puede determinar mediante dos metodos:

MACROMETODO (WINTROBE)

MICROMETODO.

MATERIAL Y REACTIVOS:

• Tubo de Wintrobe.
• Tupo capilar.
• Plastilina.
• Equipo para venopuncion.
• Centrifuga.
• Microcentrifuga.
• Pipeta pasteur tallo largo.
• Lector para hematocrito o regla.

TECNICA MACROMETODO.

1. Mezclar la muestra sanguinea suavemente y  con una pipeta pasteur llenar el tubo wintrobe colocando la punta de la pipeta hasta el fondo del tubo, la punta de la pipeta se va elevando pe permaneciendo debajo del menisco de sangre para evitar la formacion de burbujas o espuma.
2. El tubo se llena hasta la marca 100 con la muestra sanguinea y se pone a centrifugar durante 30 minutos a 3,000 r.p.m..
3. Se efectua la lectura.

TECNICA MICROMETODO.

1. Mezclar la muestra sanguinea adecuadamente y llenar un tubo capilar hasta 3/4 partes.
2. El extremo vacio que no estuvo en contacto con la sangre se sella con plastilina o calor.
3. El tubo con muestra sanguinea se coloca en la microcentrifuga a 10,000 r.p.m. durante 10 minutos.
4. Leer el porcentaje de hematocrito con el lector o medirlo con una regla.

VALORES NORMALES:

HOMBRE 47.0 + - 5.0.

MUJER: 42.0 + - 5.0.

RESULTADOS MUJER:

MACROMETODO: 48.8% 

MICROMETODO:  2.9%

HEMOGLOBINA.

HEMOGLOBINA.

PRINCIPIO DEL METODO 

La hemoglobina es oxidada por la acción del ferricianuro a 

metahemoglobina y mediante el cianuro se convierte en 

cianmetahemoglobina. 

La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de 

hemoglobina presente en la muestra ensayada1,2. 

SIGNIFICADO CLINICO 

La hemoglobina es una proteína que contiene hierro, otorga el color 

rojo a la sangre. Se encuentra en los glóbulos rojos y es la encargada 

del transporte de oxigeno por la sangre desde los pulmones a los 

tejidos. Cuando el nivel de hemoglobina aparece por debajo de los 

niveles normales indica anemia que puede obedecer a diferentes 

causas: anemia primaria, cáncer, embarazo, enfermedades renales o 

hemorragias. 

Si el nivel de hemoglobina es alto puede deberse a cardiopatías, 

deshidratación o estancia en lugares de gran altitud1,5,6. 

El diagnostico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los 

datos clínicos y de laboratorio. 

REACTIVOS 

HEMOGLOBIN 

50x 

Ferricianuro de potasio 

Cianuro de potasio 

Dihidrogeno fosfato de potasio 

0,60 mmol/L

77 mmol/L

2 mmol/L

 Patrón de Hemoglobina 15 g/dL 

Origen animal 

PRECAUCIONES 

Cianuro de potasio: Nocivo (Xn): R26/27/28: Muy tóxico por 

inhalación, por ingestión y en contacto con la piel. R32: En contacto 

con ácidos libera gases muy tóxicos. 

Peligroso para le medio ambiente (N): R52/53: Nocivo para los 

organismos acuáticos, puede provocar a largo plazo efectos 

negativos en el medio ambiente acuático. 

S7: Manténgase el recipiente bien cerrado. S28: En contacto con la 

piel, lavar inmediatamente y abundantemente con agua. S45: En 

caso de accidente o malestar, acudir inmediatamente al medico. S60: 

Elimínese el producto y su recipiente como residuos peligrosos. S61: 

Evítese su liberación al medio ambiente. Recábense instrucciones 

específicas/ las fichas de datos de seguridad. 

Cianuro (venenoso): La concentración de cianuro en el Reactivo 

concentrado (50x) es sensiblemente menor que la dosis mínima letal 

para el adulto. Su acidificación puede provocar liberación de ácido 

cianhídrico. 

PREPARACION 

Reactivo de trabajo (RT): 

- Para 5 mL 4,9 mL agua destilada + 2 gotas de Reactivo 

- Para 250 mL 245 mL agua destilada + 1 frasco (5 mL) de Reactivo 

Mezclar bien. 

Estabilidad: 2 meses en nevera a 2-8ºC, protegido de la luz. 

CONSERVACION Y ESTABILIDAD 

Todos los componentes del kit son estables, hasta la fecha de 

caducidad indicada en la etiqueta del vial, cuando se mantienen los 

viales bien cerrados a 2-8ºC, protegidos de la luz y se evita la 

contaminación durante su uso. 

No usar reactivos fuera de la fecha indicada. 

Indicadores de deterioro de los reactivos: 

- Presencia de partículas y turbidez. 

- Absorbancia (A) del Blanco a 540 nm ≥ 0,01. 

MATERIAL ADICIONAL 

- Espectrofotómetro o analizador para lecturas a 540 nm. 

- Cubetas de 1,0 cm de paso de luz. 

- Equipamiento habitual de laboratorio. 

MUESTRAS 

Sangre capilar o venosa1

. 

Usar anticoagulantes como EDTA, heparina u oxalato

PROCEDIMIENTO 

1. Condiciones del ensayo: 

Longitud de onda: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 540 nm 

Cubeta:. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. .1 cm paso de luz 

Temperatura . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . .. . . 15-25ºC 

2. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada. 

3. Pipetear: 

 Blanco Patrón Muestra 

RT (mL) 5,0 5,0 5,0 

HEMOGLOBIN CAL (μL) -- 20 -- 

Muestra (μL) -- -- 20 

4. Mezclar e incubar 3 minutos a temperatura ambiente (15-25ºC). 

5. Leer la absorbancia (A) del calibrador y la muestra, frente al Blanco 

de reactivo. 

CALCULOS 

- Con factor2

: 

(A) Muestra x 36,77 = g/dL de hemoglobina en la muestra 

- Con Patrón: 

Patrón)A(

Muestra)A( x 15 (Conc. Patrón) = g/dL de hemoglobina en la muestra 

CONTROL DE CALIDAD 

Cada laboratorio debe disponer su propio Control de Calidad y establecer 

correcciones en el caso de que los controles no cumplan con las tolerancias. HEMOGLOBIN CAL 

VALORES DE REFERENCIA1 

 Hombres 14 - 18 g/dL ≅ 8,7 - 11,2 mmol/L 

 Mujeres 12 - 16 g/dL ≅ 7,5 - 9,9 mmol/L 

Estos valores son orientativos.

RESULTADOS:

(A)MUESTRA / (A)PATRON X 15= gr/dL       ST=.340

.392/.340X15= 17.29gr/dL HOMBRE.

.304/.340X15= 13.41gr/dL MUJER.